1. Par vīrusu paraugu ņemšanas mēģeņu ražošanu
Vīrusu paraugu ņemšanas caurules pieder medicīnas ierīču produktiem.Lielākā daļa vietējo ražotāju ir reģistrēti pēc pirmās klases produktiem, un daži uzņēmumi ir reģistrēti pēc otrās klases produktiem.Pēdējā laikā, lai apmierinātu Uhaņas un citu vietu ārkārtas vajadzības, daudzi uzņēmumi ir izmantojuši “ārkārtas kanālu” “Pieteikties pirmās klases ieraksta atļaujai.Vīrusa paraugu ņemšanas caurule sastāv no paraugu ņemšanas tampona, vīrusa konservēšanas šķīduma un ārējā iepakojuma.Tā kā nav vienota valsts standarta vai nozares standarta, dažādu ražotāju produkti ir ļoti atšķirīgi.
1. Paraugu ņemšanas tampons: paraugu ņemšanas tampons tieši saskaras ar paraugu ņemšanas vietu, un paraugu ņemšanas galviņas materiāls ir cieši saistīts ar turpmāko noteikšanu.Paraugu ņemšanas tamponu galvai jābūt izgatavotai no poliestera (PE) sintētiskās šķiedras vai viskozes (mākslīgās šķiedras).Nevar izmantot kalcija algināta sūkli vai koka kociņus (ieskaitot bambusa kociņus), un tamponu galviņas materiāls nevar būt kokvilnas izstrādājumi.Tā kā kokvilnas šķiedrai ir spēcīga olbaltumvielu adsorbcija, to nav viegli eluēt nākamajā uzglabāšanas šķīdumā;un, ja tiek salauzta koka nūja vai bambusa nūja, kas satur kalcija alginātu un koka sastāvdaļas, mērcēšana uzglabāšanas šķīdumā arī adsorbēs proteīnu un pat var kavēt turpmāko PCR reakciju.Tamponu galvas materiālam ieteicams izmantot sintētiskās šķiedras, piemēram, PE šķiedru, poliestera šķiedru un polipropilēna šķiedru.Dabiskās šķiedras, piemēram, kokvilna, nav ieteicamas.Neilona šķiedras arī nav ieteicamas, jo neilona šķiedras (līdzīgi kā zobu birstes uzgaļi) absorbē ūdeni.Slikti, kā rezultātā nepietiekams paraugu ņemšanas apjoms, kas ietekmē noteikšanas ātrumu.Kalcija algināta sūklis ir aizliegts tamponu materiāla paraugu ņemšanai!Tamponu rokturis ir divu veidu: salauzts un iebūvēts.Salauzto tamponu pēc parauga ņemšanas ievieto uzglabāšanas mēģenē, un mēģenes vāciņu nolauž no parauga ņemšanas galviņas tuvumā esošās vietas;iebūvētais tampons pēc parauga ņemšanas tieši ievieto parauga ņemšanas tamponu uzglabāšanas mēģenē, un uzglabāšanas caurules vāks ir iebūvēts. Izlīdziniet mazo caurumu ar roktura augšdaļu un pievelciet caurules vāku.Salīdzinot abas metodes, pēdējā ir salīdzinoši droša.Ja salauzto tamponu lieto kopā ar mazāka izmēra uzglabāšanas cauruli, tas var izraisīt šķidruma izšļakstīšanos caurulē, kad tas tiek salauzts, un pilnībā jāpievērš uzmanība piesārņojuma riskam, ko izraisa produkta nepareiza lietošana.Tamponu roktura materiālam ieteicams izmantot dobu polistirola (PS) ekstrudētu cauruli vai polipropilēna (PP) injekcijas krocēšanas cauruli.Neatkarīgi no tā, kāds materiāls tiek izmantots, kalcija algināta piedevas nevar pievienot;koka nūjas vai bambusa nūjas.Īsāk sakot, paraugu ņemšanas tamponam ir jānodrošina paraugu ņemšanas apjoms un izdalīšanās daudzums, un atlasītajos materiālos nedrīkst būt vielas, kas ietekmē turpmāko testēšanu.
2. Vīrusu saglabāšanas risinājums: tirgū tiek plaši izmantoti divu veidu vīrusu saglabāšanas risinājumi, viens ir vīrusu uzturēšanas šķīdums, kas modificēts, pamatojoties uz transportēšanas vidi, un otrs ir modificēts šķīdums nukleīnskābju ekstrakcijas lizātam.
Pirmā galvenā sastāvdaļa ir Ērgļa bāzes barotne (MEM) jeb Henka sabalansētais sāls, kam pievienoti vīrusa izdzīvošanai nepieciešamie sāļi, aminoskābes, vitamīni, glikoze un olbaltumvielas.Šajā uzglabāšanas šķīdumā kā indikators un šķīdums tiek izmantots fenola sarkanais nātrija sāls.Kad pH vērtība ir 6,6-8,0, šķīdums ir rozā krāsā.Konservēšanas šķīdumam pievieno nepieciešamo glikozi, L-glutamīnu un proteīnu.Proteīns tiek nodrošināts liellopu augļa seruma vai liellopu seruma albumīna veidā, kas var stabilizēt vīrusa proteīna apvalku.Tā kā konservēšanas šķīdums ir bagāts ar barības vielām, tas veicina vīrusa izdzīvošanu, kā arī labvēlīgi ietekmē baktēriju augšanu.Ja konservēšanas šķīdums ir piesārņots ar baktērijām, tas vairosies lielos daudzumos.Oglekļa dioksīds tā metabolītos izraisīs konservēšanas šķīduma pH pazemināšanos no rozā. Kļūst dzeltens.Tāpēc lielākā daļa ražotāju ir pievienojuši antibakteriālas sastāvdaļas saviem preparātiem.Ieteicamie antibakteriālie līdzekļi ir penicilīns, streptomicīns, gentamicīns un polimiksīns B. Nātrija azīds un 2-metils nav ieteicami. Inhibitori, piemēram, 4-metil-4-izotiazolin-3-ons (MCI) un 5-hlor-2-metil-4 -izotiazolin-3-onu (CMCI), jo šiem komponentiem ir ietekme uz PCR reakciju.Tā kā šī konservēšanas šķīduma nodrošinātais paraugs būtībā ir dzīvs vīruss, parauga oriģinalitāti var saglabāt vislielākajā mērā, un to var izmantot ne tikai vīrusu nukleīnskābju ekstrakcijai un noteikšanai, bet arī kultivēšanai un vīrusu izolēšana.Tomēr jāņem vērā, ka, izmantojot noteikšanai, pēc inaktivācijas jāveic nukleīnskābes ekstrakcija un attīrīšana.
Cita veida konservēšanas šķīdums, kas sagatavots, pamatojoties uz nukleīnskābju ekstrakcijas lizātu. Galvenās sastāvdaļas ir sabalansēti sāļi, EDTA helātu veidojošais līdzeklis, guanidīna sāls (piemēram, guanidīna izotiocianāts, guanidīna hidrohlorīds uc), anjonu virsmaktīvā viela (piemēram, dodekāns, nātrija sulfāts), katjons. virsmaktīvās vielas (piemēram, tetradeciltrimetilamonija oksalāts), fenols, 8-hidroksihinolīns, ditiotreitols (DTT), proteināze K un citas sastāvdaļas. Šis uzglabāšanas šķīdums ir paredzēts tieši vīrusa šķelšanai, lai atbrīvotu nukleīnskābi un likvidētu RNāzi.Ja to izmanto tikai RT-PCR, tas ir piemērotāks, bet lizāts var inaktivēt vīrusu.Šāda veida paraugus nevar izmantot vīrusu kultūras atdalīšanai.
Vīrusa konservēšanas šķīdumā izmantotajam metāla jonu helātu veidojošajam līdzeklim ieteicams izmantot EDTA sāļus (piemēram, dikālija etilēndiamīntetraetiķskābi, dinātrija etilēndiamīntetraetiķskābi u.c.), un nav ieteicams lietot heparīnu (piemēram, nātrija heparīnu, litija heparīnu), lai neietekmētu PCR noteikšanu.
3. Konservēšanas caurule: Konservēšanas caurules materiāls ir rūpīgi jāizvēlas.Ir dati, kas liecina, ka polipropilēns (polipropilēns) ir saistīts ar nukleīnskābes adsorbciju, īpaši pie augstas spriedzes jonu koncentrācijas, polietilēns (polietilēns) ir vairāk priekšroka nekā polipropilēns (polipropilēns). Viegli uztverama DNS/RNS.DNS/RNS uzglabāšanai piemērotāki ir polietilēna-propilēna polimēru (poliallomēru) plastmasas un daži īpaši apstrādāti polipropilēna (polipropilēna) plastmasas konteineri.Turklāt, izmantojot plīstošu tamponu, uzglabāšanas caurulei jāmēģina izvēlēties konteineru, kura augstums ir lielāks par 8 cm, lai novērstu satura izšļakstīšanos un piesārņošanu, kad tampons tiek salauzts.
4. Ūdens ražošanas konservēšanas šķīdumam: īpaši tīrs ūdens, ko izmanto ražošanas konservēšanas šķīdumam, jāfiltrē caur ultrafiltrācijas membrānu ar molekulmasu 13 000, lai nodrošinātu polimēru piemaisījumu atdalīšanu no bioloģiskiem avotiem, piemēram, RNāzes, DNāzes un endotoksīna, un parastā attīrīšana nav ieteicama.Ūdens vai destilēts ūdens.
2. Vīrusu paraugu ņemšanas mēģeņu izmantošana
Paraugu ņemšanu, izmantojot vīrusu paraugu ņemšanas cauruli, galvenokārt iedala paraugu ņemšanā no mutes un rīkles un nazofarneksa:
1. Mutes un rīkles paraugu ņemšana: vispirms piespiediet mēli ar mēles nospiedēju, pēc tam izvelciet paraugu ņemšanas tampona galvu rīklē, lai noslaucītu abpusējās rīkles mandeles un rīkles aizmugurējo sienu, un ar vieglu spēku noslaukiet rīkles aizmugurējo sienu, nepieskaroties mēlei. vienība.
2. Nazofarneksa paraugu ņemšana: ar tamponu izmēra attālumu no deguna gala līdz auss ļipiņai un atzīmē ar pirkstu, ievietojiet paraugu ņemšanas tamponu deguna dobumā vertikālā deguna (sejas) virzienā, tamponam ir jāizstiepjas. vismaz pusi no auss ļipiņas garuma līdz deguna galam. Atstājiet tamponu degunā 15–30 sekundes, viegli pagrieziet to 3–5 reizes un izvelciet tamponu.
Pēc lietošanas metodes nav grūti saprast, vai tā ir orofaringeāla vai nazofaringeāla uztriepe, paraugu ņemšana ir tehnisks uzdevums, kas ir sarežģīts un piesārņots.Savāktā parauga kvalitāte ir tieši saistīta ar turpmāko noteikšanu.Ja savāktajam paraugam ir vīrusu slodze Zema, viegli izraisīt viltus negatīvus, grūti apstiprināt diagnozi.
Izlikšanas laiks: 21. jūnijs 2020
